Phage Display Technology
Phage Display Technology
2013
เทคโนโลยีการแสดงโปรตีนบนผิวเฟจแบบเส้นใย (filamentous phage) มีบทบาทสำคัญในการค้นคว้าวิจัยทางวิทยาศาสตร์แขนงต่างๆ อย่างมาก ตั้งแต่ถูกคิดค้นขึ้นมาเป็นครั้งแรกราว ๓๐ ปีมาแล้ว และจะยังคงมีประโยชน์อีกมากต่อไปในอนาคต โดยเฉพาะ การประยุกต์ ใช้ในงานทาง เทคโนโลยีชีวภาพ แขนงต่างๆ ทั้งทางด้านการแพทย์ ทางการเกษตร รวมทั้ง เทคโนโลยีสมัยใหม่ เช่นนาโนเทคโนโลยี ทั้งนี้เป็นเพราะคุณสมบัติ ที่โดดเด่นของเทคโนโลยีเฟจ ๓ ประการ คือ ๑) การที่โปรตีน (หรือเปบไทด์) และยีน (หรือ DNA) ที่ทำหน้าที่ สร้างโปรตีนนั้น เชื่อมกันอยู่โดยตรง คือภายในเฟจตัวเดียวกัน ทำให้สามารถศึกษาโครงสร้าง หรือ ลำดับกรดอะมิโนของ เปบไทด์ หรือโปรตีนที่แสดงอยู่บนผิวเฟจได้โดยง่าย ด้วยการวิเคราะห์ลำดับเส้น DNA ของเฟจนั้นๆ นอกจากนั้นแล้ว ยังทำให้ง่ายต่อการนำมาเพิ่มจำนวนให้มาก เพื่อการใช้ประโยชน์ต่อไป ประการที่ ๒) หลักการพื้นฐานของเทคโนโลยีเฟจนั้น คือการคัดเลือกด้วยอันตรกริยา (affinity selection) หรือ การคัดเลือก ความสามารถในการจับเป้าหมายอย่างเฉพาะเจาะจงภายใต้สภาวะต่างๆ ที่ต้องการ โดยเฟจที่อยู่ในคลัง จะต้องถูกนำมาผ่านกระบวนการคัดเลือกหลายๆ รอบจนกว่าจะได้เฟจที่มี คุณสมบัติที่เหมาะสม ซึ่งกระบวนการ คัดหาเฟจนี้ อาจถือเป็นวิธีการทางอณูชีววิทยา (molecular evolution) อย่างหนึ่งที่มีประสิทธิภาพสูง เพราะการคัดเลือก (select) นั้นทำได้ง่ายกว่าการตรวจหาทีละตัว (screen) ดังนั้นเทคโนโลยีนี้ จึงเป็นนิยมในการนำมาใช้ในการทำงานทางวิศวกรรมโปรตีน (protein engineering) ด้วยเทคนิค การกำกับวิวัฒนาการ (directed evolution) ประการสุดท้าย เทคโนโลยีเฟจ นั้น ถือเป็นเทคโนโลยี การแสดงโปรตีน (protein expression) ในแบคทีเรีย Escherichia coli ประเภทหนึ่ง ซึ่งไม่ยุ่งยาก ต้องการเพียงความรู้พื้นฐานทางอณูชีววิทยา และจุลลชีววิทยาทั่วไป จึงสะดวกต่อการนำไปประยุกต์ใช้ โดยนักวิจัยจากหลายสาขา อีกทั้งยังมีค่าใช้จ่ายในการดำเนินการต่ำ ดังนั้นนับตั้งแต่การถือกำเนิดของเทคโนโลยีนี้เป็นต้นมา ได้มีรายงานการวิจัยเกี่ยวกับการใช้ประโยชน์จากเทคโนโลยีนี้เป็นจำนวนมากทั่วโลก จึงเห็นได้ว่าเทคโนโลยีเฟจ มีศักยภาพสูงมากในการนำมา ประยุกต์ใช้ในงานวิจัยทางเทคโนโลยีชีวภาพแขนงต่างๆ ทั่วโลก รวมทั้งในประเทศไทย
การประยุกต์ใช้เทคโนโลยีชีวภาพบนผิวเฟจนั้น ทำได้หลายลักษณะ ขึ้นกับชนิดของโปรตีนที่นำมาแสดงไว้ (display) ซึ่งขนาดของโปรตีนที่สามารถแสดงบนผิวเฟจได้นั้นมีได้อย่างหลากหลายคือตั้งแต่ เป็นเส้นเปบไทด์สั้นๆ ความยาว ๗ กรดอะมิโน จนถึงโปรตีนขนาดใหญ่ ๓๐๐ กรดอะมิโน โดยเปบไทด์เส้นสั้นๆ บนผิวเฟจนั้นนับเป็นแหล่งสำคัญในการพัฒนายา หรือวัคซีน รวมทั้งในงานทางนาโนเทคโนโลยีที่สำคัญ ส่วนโปรตีนที่สามารถแสดงบนผิวเฟจได้นั้นมีหลายประเภท เช่น แอนติบอดี เอนไซม์ โปรตีนโครงสร้างชนิดต่างๆ (scaffold protein) รวมทั้งคลัง gemomic และ cDNA จากสิ่งมีชีวิตต่างๆ โดยเฉพาะโปรตีน ที่เป็นส่วนโมเลกุลของแอนติบอดีที่อยู่บนผิวเฟจ ซึ่งมีโครงสร้างต่างๆ กันนั้น มีความสำคัญ อย่างยิ่งในการประยุกต์ใช้ทางเทคโนโลยีชีวภาพแขนงต่างๆ โดยเฉพาะทางการแพทย์ เพราะแอนติบอดี เป็นสารทางชีวภาพที่มีศักยภาพสูงมากในการรักษาโรคที่รักษาได้ยาก ซึ่งจะได้กล่าวถึง การประยุกต์ใช้เทคโนโลยีเฟจในงานทางเทคโนโลยีชีวภาพโดยแบ่งตาม ประเภทของ โมเลกุลที่แสดง โดยละเอียด ใน Blog ต่างๆ ต่อไป
จนถึงปัจจุบันหัวหน้าหน่วยวิจัยเทคโนโลยีชีวภาพ มีผลงานตีพิมพ์ในวารสารทางวิชาการที่ต้องผ่านการประเมินโดยผู้ทรงคุณวุฒิดังนี้
1.Srila, W., Yamabhai, M., 2013. Identification of Amino Acid Residues Responsible for the Binding to Anti-FLAG M2 Antibody Using a Phage Display Combinatorial Peptide Library. Appl Biochem Biotechnol. [IF 1.893]
2.Khuoshab, F., Jaruseranee, N., Tanthanuch, W., Yamabhai, M., 2012. Formation of chitin-based nanomaterials using a chitin-binding peptide selected by phage-display. Int J Biol Macromol. [IF 2.596]
3.Rangnoi, K., Jaruseranee, N., O'Kennedy, R., Pansri, P., and Yamabhai, M. (2011). One-Step Detection of Aflatoxin-B(1) Using scFv-Alkaline Phosphatase-Fusion Selected from Human Phage Display Antibody Library. Mol Biotechnol. [IF 2.262]
4.Pansri, P., Jaruseranee, N., Rangnoi, K., Kristensen, P., and Yamabhai, M. (2009). A compact phage display human scFv library for selection of antibodies to a wide variety of antigens. BMC Biotechnol 9, 6. [IF 2.165]
5.Na-ngam, N., Kalambaheti, T., Ekpo, P., Pitaksajjakul, P., Jamornthanyawat, N., Chantratita, N., Sirisinha, S., Yamabhai, M., Thamlikitkul, V., and Ramasoota, P. (2008). Mimotope identification from monoclonal antibodies of Burkholderia pseudomallei using random peptide phage libraries. Trans R Soc Trop Med Hyg 102 Suppl 1, S47-54.
6.Yamabhai, M. (2008). BAP-fusion: a versatile molecular probe for biotechnology research. In Biotechnology: Research, Technology and Applications, F.W. Richter, ed. (Hauppauge, NY NOVA Science Publishers, Inc), pp. 327-345.
7.Na-ngam, N., Kalambaheti, T., Ekpo, P., Pitaksajjakul, P., Jamornthanyawat, N., Chantratita, N., Sirisinha, S., Thamlikitkul, V., Chaicumpa, W., Yamabhai, M., and Ramasoota, P. (2008). Immune responses of selected phagotopes from monoclonal antibodies of Burkholderia pseudomallei. Southeast Asian J Trop Med Public Health 39, 443-451.
8.Yamabhai, M. (2005). A convenient method for the screening of compounds that inhibit specific molecular interactions using the alkaline phosphatase fusion system. Acta Hort 678, 51-57.
9.Yamabhai, M., and Kay, B.K. (2001). Mapping protein-protein interactions with alkaline phosphatase fusion proteins. Methods Enzymol 332, 88-102. [IF 2.002]
10.Kay, B.K., Kasanov, J., and Yamabhai, M. (2001). Screening phage-displayed combinatorial peptide libraries. Methods 24, 240-246. [IF 3.641]
11.de Beer, T., Hoofnagle, A.N., Enmon, J.L., Bowers, R.C., Yamabhai, M., Kay, B.K., and Overduin, M. (2000). Molecular mechanism of NPF recognition by EH domains. Nat Struct Biol 7, 1018-1022. [IF 11.902]
12.Adams, A., Thorn, J.M., Yamabhai, M., Kay, B.K., and O'Bryan, J.P. (2000). Intersectin, an adaptor protein involved in clathrin-mediated endocytosis, activates mitogenic signaling pathways. J Biol Chem 275, 27414-27420. [IF 4.651]
13.Santolini, E., Salcini, A.E., Kay, B.K., Yamabhai, M., and Di Fiore, P.P. (1999). The EH network. Exp Cell Res 253, 186-209. [IF 3.557]
14.Kay, B.K., Yamabhai, M., Wendland, B., and Emr, S.D. (1999). Identification of a novel domain shared by putative components of the endocytic and cytoskeletal machinery. Protein Sci 8, 435-438. [IF 2.735]
15.Hussain, N.K., Yamabhai, M., Ramjaun, A.R., Guy, A.M., Baranes, D., O'Bryan, J.P., Der, C.J., Kay, B.K., and McPherson, P.S. (1999). Splice variants of intersectin are components of the endocytic machinery in neurons and nonneuronal cells. J Biol Chem 274, 15671-15677. [IF 4.651]
16.Yamabhai, M., Hoffman, N.G., Hardison, N.L., McPherson, P.S., Castagnoli, L., Cesareni, G., and Kay, B.K. (1998). Intersectin, a novel adaptor protein with two Eps15 homology and five Src homology 3 domains. J Biol Chem 273, 31401-31407. [IF 4.651]
17.Yamabhai, M., and Kay, B.K. (1997). Examining the specificity of Src homology 3 domain--ligand interactions with alkaline phosphatase fusion proteins. Anal Biochem 247, 143-151. [IF 2.582]
หน่วยวิจัยเทคโนโลยีชีวภาพบนผิวเฟจ
9/14/2556
Principle Investigator
Montarop Yamabhai, Ph.D.
Research Scientists
Kuntalee Rangnoi, M.Sc., Natcha Pruksamethanan, B.Sc., Witsanu Srila, M.Sc., Thitima Sumphanapuy, B.Sc., Napolean Bonaparte, Ph.D., Kirana Yoohat, M.Sc., Pensuda Somphunga, B.Sc., Nanthnit Jaruseranee, Ph.D.